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                生物緩沖液都有哪些,究●竟應該怎麽選呢?
                文章來源:江蘇大发彩票app下载安装有限公司   添加時間:2020/11/6 16:08:14 點擊率:84

                生物緩沖液是一種能在加╳入少量酸或堿時保持溶ξ液的pH值相對穩♀定的溶液,多數細胞僅能在很窄的pH範圍內★進行活動,需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化。在生化研究工作中,常∮常要用到緩沖溶液來維持實驗體系的酸堿度。

                讓我們來看看常用的生物緩沖液,以及它們的特點:

                1. 磷酸鹽緩沖液

                磷酸鹽緩沖液是應用廣←泛的緩沖液。由於其⊙二次離解作用,緩沖液pH值範圍較寬,可配置不同pH值的酸性、堿性和〒中性緩沖液:

                制備酸性緩沖液可直接使用NaH2PO4或KH2PO4, pH值範圍為1~5;

                堿性緩沖液可直接使用Na2HPO4或K2HPO4, pH範圍為9~12;

                中性緩沖液中含有等量的NaH2PO4和Na2HPO4或等量的KH2PO4和K2HPO4溶液,pH值為5.5~8.5。

                優點:①易於配制成各種濃度 ;②pH值範圍寬;③pH受溫度的影響小;

                缺點:①易與常見的鈣、鎂、重金屬離子↘形成沈澱;②抑制某些生化過程;

                2. Tris緩沖液

                Tris緩沖液在生物化學▲研究中有著廣泛的應用。它是弱堿,通常在“中性”範圍內使用。Tris-HCl緩沖:pH = 7.5 ~ 8.5;三磷▃酸緩沖液:pH = 5.0 ~ 9.0。

                除TRIS - hcl外,TRIS還有多種衍生化緩沖

                TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl,常用來清洗免疫染色組織或Western blotting中的Western blotting膜;

                TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20,一々種常用於Western Blotting的膜緩沖液;

                TE=Tris-HCl+EDTA,對DNA堿基具有保護ξ 作用,常用於DNA的穩定和儲存;

                TAE=Tris堿+乙酸+EDTA,是一種廣泛◇應用於短片段DNA電泳的緩沖體系;

                TBE=三堿基+硼酸+EDTA,適用於長期DNA電泳,對小片段有較好的分離效果。

                優點: ①因為Tris堿的堿性較強〓,所以可以只用這一種緩沖體系配制pH範圍由酸性到堿性的大範圍pH值的緩沖液▅;②對生物化學過程幹擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離╱子發生沈澱。

                缺點:①緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液→稀釋十倍,pH值的變化大於0.1;②溫度∏效應大,溫度變Ψ化對緩沖液pH值的影響很大,所以一定要在使用溫度下進行配↙制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用於0℃~4℃。 ③易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴密封。④此緩沖液對某些pH電極發↓生一定的幹擾作用,所以要使ω用與Tris溶液具有兼容性的電極。

                3. Good’s緩沖液

                在 1960 年代中期,N.E.Good鑒於一般的緩沖液系統並不適合生化實驗所使用,必須用人為設計和人工合成卐的方法來找到專門用於生命科學研究的特定的緩沖體系,這些緩沖體系們都具有以下特質:

                1.pKa 在6~8 之間;2.在水溶液中有高溶解度;3.鹽效應很小;4.不易被運送通過細胞膜;5.不易受溫度、離子組成、濃度等因素影響解離度;6.不★會與金屬離子形成錯合物,或錯合物不沈澱、不幹擾生物活性;7.化①學性質穩定。

                Good’s緩沖液的主要優點是不參加和不幹擾生物化學反應過程,對酶化學反應等無抑◣制作用,所以它們專門用於細胞器和極易變性的、對pH敏感的蛋白質和酶的研究工作。

                其缺點是:①價格昂貴,②對測定蛋白質含量的雙縮脲法和Lowry法不適用,因為它們會使空白管的顏色加深。

                4.甘氨酸緩沖液

                甘氨酸緩沖液pH值範圍廣,應用範圍廣。

                優點:為細胞成分和各種提取物提供更親近的自然環境。

                缺點:類似於磷酸鹽緩沖體系;幹擾某些生化反應過程,例如ω 代謝過程。


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