細胞培養技◥術也叫細胞克隆技術,在生物學中≡的正規名詞為細胞培養技術。不論對於整個生物工程技術,還是其中之一的生物克№隆技術來說,細胞培養都是一個必↓不可少的過程。
當細胞培養中組織培養▲被汙染的時候,研究者會』試圖消除或控制汙染。首先,確定汙染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把汙染細胞與其它≡細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。 高濃度⊙的抗生素和抗黴菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗黴菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性黴素B和抗黴菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是為您推薦確定毒性水平和消除培養汙染的實驗步驟:
1. 在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。
2. 分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度範圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性黴素B推薦下列ζ濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3. 每天觀測細胞ω 毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。
4. 確定抗生素毒性水平後,使用低於毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2~3代。
5. 在①無抗生素的培養基中培養細胞一代。
6. 重復步驟4。
7. 在無抗生素的培養基中培養4~6代,確定汙染是否以已◆被消除。
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