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                ELISA试剂盒常见一些问题
                文章来源:江苏大发彩票app下载安装有限公司   添加时间:2020/3/13 15:26:58 点击率:136

                ELISA试剂盒以灵敏度︼较高、特异性较好的特点得到了广泛的应用,但操作中的各个∩环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显¤色不全、花板等结果。现将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启发,提高试验质量。下面分析ELISA试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法。
                一、选择试剂
                    选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作▂,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
                二、加样
                可能原因:
                1)血清或血浆标本分离不好即进行∑加样;

                2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间@ 过长㊣ (特别是室内温度较高时);

                3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔╲外。
                解决办法:
                1) 标本为血清:zui好将血︻液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必◆须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段№时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。

                 2) 加样后及时放入↘孵箱。

                 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

                 4) 如果采用AT或其他全自动∑ 加样,zui好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

                 5) 标本较★多时,请分批△操作。
                三、 孵育
                可能原因:
                1) 孵育时未贴封片或▽加盖,使标〖本或稀释液蒸发,吸ζ 附于孔壁,难于清洗彻底;

                2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于○反应孔周围,难以清洗彻底。
                解决办法:
                1) 贴封片或加盖; 2) 按说明步骤严格控制操作时间。
                四、洗板
                ELISA试剂盒可能原因:
                1) 采用手※工洗板,孔与孔之间液体交叉▆。

                2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量◆不足,导致洗板不彻底①;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。

                3) 反应板过多造成洗板等待时间长。
                解决办法:
                1) 保证洗液注满各孔,洗板︾针畅通,洗完板后zui好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻々轻拍干;

                2) 合理安排,或多用几台洗板机。
                五、显色
                可能原因:
                1) 显色剂配制后放置时间过长或◤使用过期显色剂;

                2) 加显色剂时溅出孔外造成液□体回流。
                解决办法:

                1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过←期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用;

                2) 加样时→保持显色剂不外流;

                3) A、B液应避免接触金属器械。
                六、终止
                    可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免〖产生气泡。
                七、读板
                    如读板时板底不清洁等。应保证酶标板◥清洁。所以在整个操作过程中保证酶标板不接触■次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有ㄨ效提高检测质量。
                    ELISA试剂盒在实际操作中,除◥了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内ぷ质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作■用。

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